中枢神経系のイメージング

专利摘要:
本発明は、インビボイメージング剤として使用することができる新規化合物を提供する。本発明の化合物は、一連の病態の診断を容易にする手段として、被検体におけるＰ２Ｘ７受容体の発現をイメージングするための方法において有用である。 なし
公开号:JP2011513277A
申请号:JP2010548105
申请日:2009-02-26
公开日:2011-04-28
发明作者:ウィルソン，イアン；ウィン，ダンカン；ウッドクラフト，ジョン；ジャクソン，アレックス；ジョーンズ，クレア；ジョーンズ，ポール・アレキサンダー；モリソン−イヴソン，ヴェロニーク
申请人:ジーイー・ヘルスケア・リミテッド；
IPC主号:C07D215-38

专利说明:

[0001] 本発明は、プリン作動性Ｐ２受容体の分野に関する。より詳細には、本発明は、新規なプリン作動性Ｐ２Ｘ７受容体インビボイメージング剤、それらの製造及びそれらの中間体に関する。さらに詳細には、本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体発現が関与している病態の診断に有用な情報を提供するための方法における本発明のインビボイメージング剤の使用に関する。]
背景技術

[0002] Ｐ２Ｘ７受容体は、細胞外ＡＴＰ（唯一の知られている生理学的リガンド）及び少数の薬理学的ＡＴＰ類似体により直接開閉される陽イオン選択的なイオンチャネルである（Ｎｏｒｔｈ ２００２ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８２：１０１３〜１０６７）。傷害された細胞からのＡＴＰの放出と、それに続く造血細胞（ミクログリア、マクロファージ及びリンパ球など）上にあるプリン作動性Ｐ２Ｘ７受容体の活性化は、炎症カスケードに極めて重要である（Ｆｅｒｒａｒｉ Ｄ ｅｔ ａｌ，２００６ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：３８７７〜８３）。形質膜Ｐ２Ｘ７チャネルの開口に伴う陽イオン移動は、主要なプロ炎症性サイトカイン、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の成熟及び放出に必要である。Ｐ２Ｘ７の発現は、正常組織において低いが、炎症（中枢性であれ末梢性であれ）中には、周辺領域における細胞上でＰ２Ｘ７反応性の大幅な増加がある。]
[0003] 中枢神経系（ＣＮＳ）において、Ｐ２Ｘ７の増加は、脳卒中（Ｆｒａｎｋｅ ｅｔ ａｌ，２００４ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．６３：６８６〜９９）、多発性硬化症（ＭＳ）（Ｙｉａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ，２００６ＢＭＣ．Ｎｅｕｒｏｌ．６：１２）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（Ｙｉａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ，２００６前掲書）、癲癇（Ｒａｐｐｏｌｄ ｅｔ ａｌ，２００６ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．１０８９：１７１〜８）の実験的誘発の後に、及びトランスジェニックのアミロイドアルツハイマー病マウス（Ｐａｒｖａｔｈｅｎａｎｉ ｅｔ ａｌ，２００３ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１３３０９〜１７）において特徴付けられている。末梢において、Ｐ２Ｘ７受容体アップレギュレーションは、神経障害性疼痛（Ｃｈｅｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ，２００５ Ｐａｉｎ １１４：３８６〜９６）、多発性嚢胞腎（Ｆｒａｎｃｏ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ ｅｔ ａｌ，２００６ Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２５３〜６１）、及び結核（Ｈｉｌｌｍａｎ ｅｔ ａｌ，２００５ Ｎｅｐｈｒｏｎ．Ｅｘｐ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０１：ｅ２４〜３０）に伴って起きることが明らかにされている。]
[0004] Ｐ２Ｘ７アップレギュレーションは、実験モデルと患者の両方で、様々な癌、例えば、子宮頸癌、子宮癌、前立腺癌、乳癌及び皮膚癌並びに白血病でも明らかにされている（Ｆｅｎｇ ｅｔ ａｌ，２００６ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：１７２２８〜３７；Ｇｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ，２００３ Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２１：３１５〜３２７；Ｓｌａｔｅｒ ｅｔ ａｌ，２００４ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ４４：２０６〜２１５；Ｓｌａｔｅｒ ｅｔ ａｌ，２００４ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．８３：１〜１０；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ，２００４ Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ ２８：１３１３〜１３２２；Ｌｉ ｅｔ ａｌ，２００６ Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ Ｐｒｅｖ．１５：１９０６〜１３）。]
[0005] 治療用のＰ２Ｘ７アンタゴニストを創生するために、多くの化合物クラスが、異なる構造骨格から合成されている。Ｐ２Ｘ７受容体において作用するアゴニスト及びアンタゴニストの総説は、Ｂａｒａｌｄｉ ｅｔ ａｌ（２００４ Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４：１７０７〜１７）により発表されている。その中に開示されている化合物は、潜在的に有用な治療用薬剤であるとして議論されている。]
[0006] 低分子のＰ２Ｘ７結合性化合物も、インビボイメージング応用例に関連して開示されている。国際公開第２００７／１４１２６７号は、主に治療に関連しており、疼痛、炎症及び神経変性を治療するためのＰ２Ｘ７アンタゴニストであるピラゾール誘導体を提供している。化合物の同位体標識形は、単光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）又はＰＥＴによるインビボイメージングに有用であると述べられているが、かかる同位体標識形を得る方法に関する詳細は国際公開第２００７／１４１２６７号に提供されていない。国際公開第２００７／１０９１５４号及び同第２００７／１０９１９２号も、主に治療に関連しており、Ｐ２Ｘ７モジュレーターとしてのビシクロヘテロアリール化合物を開示している。１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏ又は１３Ｎを含むこれらの同位体バリアントは、基質受容体占有のＰＥＴ研究に有用であると述べられているが、それらの同位体バリアントを得る方法についての説明は国際公開第２００７／１０９１５４号及び同第２００７／１０９１９２号のいずれにもない。国際公開第２００８／０６４４３２号は、本願よりも優先日は早いが、その発行日は本願優先日よりも遅い。国際公開第２００８／０６４４３２号は、Ｐ２Ｘ７受容体が関与している障害を診断、治療又はモニターするための多環式化合物を開示している。Ｐ２Ｘ７受容体機能アッセイで試験された国際公開第２００８／０６４４３２号の化合物は、化合物が、Ｐ２Ｘ７受容体のアンタゴニストであることを証明した。国際公開第２００８／０６４４３２号の化合物は、例えば、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴによるインビボイメージングに適している同位体で放射性標識することができ、インビボイメージング研究に特に適している物理化学的特性を有する。]
先行技術

[0007] 国際公開第２００７／１４１２６７号
国際公開第２００７／１０９１５４号
国際公開第２００７／１０９１９２号]
発明が解決しようとする課題

[0008] Ｐ２Ｘ７受容体、特に、中枢神経系（ＣＮＳ）のＰ２Ｘ７受容体に関連する病態の診断を容易にするためにＰ２Ｘ７受容体をイメージングするのに適している代替インビボイメージング剤の余地がある。]
課題を解決するための手段

[0009] 本発明は、インビボイメージング剤として使用することができる新規化合物を提供する。本発明のインビボイメージング剤は、一連の病態の診断を容易にする手段として、被検体のＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の発現をイメージングするための方法において特に有用である。]
[0010] インビボイメージング剤
一態様では、本発明は、被検体の中枢神経系（ＣＮＳ）のインビボイメージングに適したインビボイメージング剤を提供し、インビボイメージング剤は、式ＩＩ〜ＩＶのいずれかの化合物又はその塩若しくは溶媒和物である。]
[0011] 式ＩＩは以下の通り定義される。]
[0012] 式中、Ｒ５〜Ｒ１０のいずれかはγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属であるインビボイメージング基を含んでおり、
Ｒ５及びＲ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６フルオロアルキル、Ｃ１−６アシル、Ｃ１−６フルオロアシル、Ｃ１−６カルボン酸アルキルエステル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６フルオロアルコキシから独立に選択されるものであるか、或いはＲ１及びＲ２は、それらに結合した窒素と共に、含窒素五又は六員複素環であって、適宜、窒素、イオウ又は酸素から選択されるもう１つのヘテロ原子を含んでいてもよく、適宜、環上に１又は２つのオキソ基を有していてもよい含窒素五又は六員複素環を形成し、
Ｒ７〜Ｒ９は、水素、ハロ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ５−６アリール又はＣ５−６ハロアリールから独立に選択され、
Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、ニトロ、ハロから選択されるものであるか、或いはＣ（＝Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２基であり（Ｒ１１及びＲ１２は、Ｒ５及びＲ６について定義した通りである。）、
Ａｒ２は、窒素、酸素及びイオウから選択されるヘテロ原子を０〜３個有する五又は六員アリール基である。]
[0013] 式ＩＩＩは以下の通り定義される。]
[0014] 式中、Ｒ１３又はＲ１４のいずれかはγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属であるインビボイメージング基を含んでおり、
Ａｒ３は、窒素、酸素及びイオウから選択されるヘテロ原子を０〜３個有する五乃至十員芳香族環であり、
Ｒ１３及びＲ１４は、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルキレン−ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＨ−Ｃ１−６アルキレン−ＮＲ１５Ｒ１６から独立に選択されるものであり、Ｒ１５及びＲ１６は、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アセチルから独立に選択されるか、或いはＲ１５及びＲ１６は、それらに結合した窒素と共に、窒素、酸素及びイオウから選択される１〜３個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい含窒素Ｃ５〜１２複素環を形成する。]
[0015] 式ＩＶは以下の通り定義される。]
[0016] 式中、Ｒ１７−２０のいずれかはγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属であるインビボイメージング基を含んでおり、
Ｒ１７及びＲ１８は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル及びＣ１−３ヒドロキシアルキルから独立に選択され、
Ｒ１９及びＲ２０は、水素、ハロ、Ｃ１−３アルキル及びＣ１−３ハロアルキルから独立に選択され、
Ａｒ４は、窒素、酸素及びイオウから選択されるヘテロ原子を０〜３個有する五乃至十二員アリール基である。]
[0017] 「インビボイメージング剤」という用語は、イメージング剤を被検体に投与し、被検体の体内のイメージング剤を体外から検出することによって、生きた被検体における特定の生理学的又は病態生理学的状態を検出することができる化合物を意味する。]
[0018] 「中枢神経系（ＣＮＳ）のインビボイメージングに適した」ものとするため、インビボイメージング剤は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過できることが必要とされる。「ＣＮＳ」は、髄膜で覆われた脳及び脊髄を含む被検体の神経系の部分である。一般に認められているＢＢＢ通過の生物物理学的／物理化学的モデルは、受動輸送の一次決定因子として、溶質の親油性、水素結合脱溶媒和電位、ｐＫａ／電荷及び分子サイズを有する。例えば、ある化合物についてＢＢＢ通過に適した親油性の値は、１．０〜４．５、好ましくは２．０〜３．５の範囲のｌｏｇＰであろう。]
[0019] 本発明の「被検体」は、好ましくは哺乳類であり、最も好ましくはインタクトな哺乳類の生体である。特に好ましい実施形態では、本発明の被検体はヒトである。]
[0020] 「その塩又は溶媒和物」という用語について、適当な塩は、（ｉ）生理学的に許容される酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸及び硫酸などの鉱酸から誘導される塩、並びに酒石酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸から誘導される塩、（ｉｉ）生理学的に許容される塩基の塩、例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、トリエタノールアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ピペリジン、ピリジン、ピペラジン及びモルホリンなどの有機塩基との塩、及びアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩から選択し得る。適当な溶媒和物は、エタノール、水、生理的食塩水、生理的緩衝液及びグリコールで形成されたものから選択し得る。]
[0021] 「インビボイメージング基を含む」という用語は、本明細書中で定義した式Ｉ〜ＩＶのいずれかのインビボイメージング剤の官能基が、インビボイメージング基を含むことを意味する。官能基がイメージング基を含む場合、これは、「イメージング基」が化学構造の一部を形成しているとともに、同位体の天然存在比を有意に超えるレベルで存在する放射性同位体であることを意味する。かかる同位体の濃縮度は、その同位体の天然存在比の好適には５倍以上、好ましくは１０倍以上、最も好ましくは２０倍以上であり、理想的には５０倍以上であるか、或いはその同位体の濃縮度が９０〜１００％であるようなレベルで存在する。かかる官能基の例としては、１２３Ｉ濃縮ヨードフェニル基、１１Ｃ濃縮ＣＨ３基及び１８Ｆ濃縮フルオロアルキル基が挙げられ、イメージング基は、化学構造中の同位体標識１１Ｃ又は１８Ｆ原子である。本発明のインビボイメージング剤に上記その他の適当な官能基を如何にして導入するかについては、後で詳しく説明する。]
[0022] 本発明の適当な「インビボイメージング基」は、γ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属のいずれかである。インビボイメージング基がγ線放出型放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは好適には１２３Ｉ、１３１Ｉ又は７７Ｂｒから選択される。１２５Ｉは、インビボイメージング用途に適していないので、除外される。インビボイメージングに好ましいγ線放出型放射性ハロゲンは１２３Ｉである。イメージング基が陽電子放出型放射性非金属である場合、かかる陽電子放出体として好適なものとして、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ又は１２４Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は１１Ｃ、１３Ｎ、１８Ｆ及び１２４Ｉ、特に１１Ｃ及び１８Ｆであり、最も好ましくは１８Ｆである。]
[0023] 「Ｐ２Ｘ７受容体のリガンド」である化合物は、ＨＥＫ．２９３細胞において非選択的なポアを形成するアゴニストの機能の４０％以上（好ましくは６０％以上、最も好ましくは７０％以上）の阻害を示す（Ｍｉｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ，Ｂ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８；１２５：１１９４〜１２０１参照）。結合親和性の点から見ると、Ｐ２Ｘ７受容体のリガンドは、０．０１〜１００ｎＭ、好ましくは０．０１〜１０ｎＭ、最も好ましくは０．０１〜１ｎＭのＫｄ又はＫｉを有する（Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ ｅｔ ａｌ，１９９８ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、５４：２２〜３２；Ｃｈｅｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ，１９９８ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１２４：１３１４〜１３２０により測定されるように）。Ｐ２Ｘ７受容体に対する結合親和性に関して、本発明のインビボイメージング剤は、他のＰ２受容体に対しては１０μＭ以下の親和性を有しないのが好ましい。本発明のインビボイメージング剤は好ましくはＰ２Ｘ７受容体のアンタゴニストである。]
[0024] 「アルキル」という用語は、別途記載しない限り、それ単独で又は他の用語との組合せで、炭素原子数１〜６、好ましくは炭素原子数１〜３の直鎖又は枝分れアルキル基を意味する。かかる基の例としては、特に限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソアミル、ヘキシル、オクチルが挙げられる。]
[0025] 「アルコキシ」という用語は、別途記載しない限り、それ単独で又は他の用語との組合せで、アルキルエーテル基（但し、アルキルは上記で定義した通りである。）を意味する。適当なアルキルエーテル基の例としては、特に限定されないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。]
[0026] 「アリール」とは、フェニル又はナフチルなどのように、環系の炭素原子数が５〜１２、好ましくは５〜６の芳香族環又は環系を意味する。「ヘテロアリール」置換基は、上記で定義したアリールであって、環の炭素原子の１以上がＮ、Ｓ又はＯから選択されるヘテロ原子で置き換えられているものをいう。]
[0027] 「アシル」は、ＲＣ（＝Ｏ）基を含む基として定義され、Ｒは上記で定義したアルキル基である。「アセチル」は、Ｒ基がメチルであるアシル基である。]
[0028] 「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素から選択される置換基を意味する。「ハロアルキル」、「ハロアシル」、「ハロアルコキシ」及び「ハロアリール」は、それぞれ、上記で定義したアルキル、アシル、アルコキシ及びアリール基が１以上のハロ基で置換されたものである。]
[0029] 「ヒドロキシル」は−ＯＨ基である。「ヒドロキシアルキル」という用語は、上記で定義したアルキル基が１以上のヒドロキシル基で置換されたものをいう。]
[0030] 「ニトロ」は−ＮＯ２基である。]
[0031] 「オキソ」は＝Ｏ基である。]
[0032] 「アルキレン」という用語は、式（ＣＨ２）ｎの二価リンカーであって、別途記載しない限り、ｎは好ましくは１〜６である。]
[0033] 「複素環」という用語は、１以上の窒素、酸素又はイオウを環の構成元素として有する脂肪族又は芳香族Ｃ５〜１２環基を意味する。Ｃ６〜１０環基が好ましい。]
[0034] 「カルボン酸アルキルエステル」という用語は、式Ｒ′Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ″で定義される基であり、Ｒ′及びＲ″は上記で定義したＣ１−６アルキル基である。]
[0035] 好ましい実施形態では、本発明のインビボイメージング剤は、式ＩＩの化合物である場合には、次の式ＩＩ＊の化合物である。]
[0036] 式中、Ｒ８＊及びＲ９＊の一方は１８Ｆであり、他方は水素である。]
[0037] 別の好ましい実施形態では、本発明のインビボイメージング剤は、式ＩＩＩの化合物である場合には、次の式ＩＩＩ＊の化合物である。]
[0038] 式中、Ｒ１３＊はＣ１−６アルキレン−ＮＨＲ１５＊であり、Ｒ１５＊はＣ１−６［１８Ｆ］−フルオロアルキル又はＣ１−６［１８Ｆ］−フルオロアルコキシである。]
[0039] 別の好ましい実施形態では、本発明のインビボイメージング剤は、式ＩＶの化合物である場合には、次の式ＩＶ＊の化合物である。]
[0040] 式中、Ｒ１７＊及びＲ１８＊は共にハロであり、Ｒ１９＊及びＲ２０＊の一方は１８Ｆであり、他方は水素である。]
[0041] 合成方法及び前駆体
本発明のインビボイメージング剤は、望ましいインビボイメージング基の適当な供給源と前駆体化合物との反応によって得ることができる。]
[0042] 「前駆体化合物」には、上記の式ＩＩ〜ＩＶの化合物の非標識誘導体であって、適当な化学的形態のイメージング基との化学反応が部位特異的に起こり、最小限の段階数（理想的には一段階）で実施でき、しかも多大な精製を行わずに（理想的にはそれ以上精製せずに）式ＩＩ〜ＩＶのインビボイメージング剤が得られるように設計されたものが包含される。かかる前駆体化合物は合成品であり、良好な化学的純度で得ることができる。前駆体化合物は、適宜、前駆体化合物の官能基に対する保護基を含んでいてもよい。]
[0043] 「保護基」という用語は、不都合な化学反応は阻害又は抑制するが、分子の残りの部分を修飾しない十分穏和な条件下で当該官能基から脱離させることができる十分な反応性をもつように設計された基を意味する。脱保護後に、式ＩＩ〜ＩＶの所望のインビボイメージング剤が得られる。保護基は当業者に周知であり、好適には、アミン基については、Ｂｏｃ（Ｂｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［すなわち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］又はＮｐｙｓ（すなわち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から、カルボニル基については、メチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル又はベンジルエステルから選択される。ヒドロキシ基に対する適当な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル［Ｔｒｔ］或いはテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。チオール基に対する適当な保護基は、トリチル及び４−メトキシベンジルである。その他の保護基の使用については、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。]
[0044] イメージング基が放射性ヨウ素である場合、本明細書で定義した式ＩＩ〜ＩＶのインビボイメージング剤は、求電子又は求核ヨウ素化或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を起こすような誘導体を含む前駆体化合物によって得ることができる。前者に属するものの例としては、以下の（ａ）〜（ｃ）が挙げられる。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えばトリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えばトリメチルシリル）又は有機ホウ素化合物（例えば、ボロン酸エステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体、
（ｂ）ハロゲン交換のための非放射性臭化アルキル、或いは求核ヨウ素化のためのアルキルトシレート、メシレート又はトリフレート、
（ｃ）求電子ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばフェノール）及び求核ヨウ素化用の活性化芳香族環（例えばアリールヨードニウム、アリールジアゾニウム、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。]
[0045] かかる前駆体化合として好ましいのは、ヨウ化又は臭化アリールのような非放射性ハロゲン原子（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、有機金属置換物（例えばトリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、トリアゼンのような有機置換物、或いはヨードニウム塩のような求核置換反応のための良好な脱離基である。放射性ヨウ素化では、好ましくは、前駆体化合物は有機金属置換物を含み、最も好ましくはトリアルキルスズを含む。]
[0046] 前駆体化合物及び放射性ヨウ素を有機分子に導入する方法は、Ｂｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］に記載されている。適当なボロン酸エステル有機ホウ素化合物及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ ｅｔ ａｌ［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｉ．，２９，８４１−８４３（２００２）ａｎｄ ３０，３６９−３７３（２００３）］に記載されている。適当なオルガノトリフルオロボレート及びその製造方法は、Ｋａｂａｌａｋａ ｅｔ ａｌ［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３１，９３５−９３８（２００４）］に記載されている。]
[0047] 放射性ヨウ素を結合させることのできるアリール基の例としては、以下のものがある。]
[0048] いずれも、芳香族環での放射性ヨウ素置換が容易な置換基を含んでいる。]
[0049] 放射性ヨウ素を含む他の置換基は、例えば以下のような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成することができる。]
[0050] 飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子はインビボで代謝され易く、放射性ヨウ素が失われ易いことが知られているので、放射性ヨウ素原子は好ましくは芳香族環（ベンゼン環など）又はビニル基に共有結合で直接結合させる。]
[0051] １１Ｃでの標識法の一つは、メチル化化合物の脱メチル化型である前駆体化合物と［１１Ｃ］メチルヨウ化物とを反応させることである。所望のインビボイメージング剤の特定の炭化水素鎖のグリニャール試薬と［１１Ｃ］ＣＯ２との反応によって１１Ｃを導入して、前駆体化合物のアミン基と反応する１１Ｃ試薬を得て、１１Ｃ標識インビボイメージング剤を得ることもできる。]
[0052] １１Ｃは、芳香族環のメチル基として導入することもでき、その場合、前駆体化合物は、トリアルキルスズ基又はＢ（ＯＨ）２基を含んでもよい。]
[0053] １１Ｃの半減期はわずか２０．４分にすぎないので、中間体の１１Ｃ部分が高い比活性を有していて、できるだけ迅速な反応プロセスを用いて生成させることが重要である。]
[0054] かかる１１Ｃ標識技術の概説は、Ａｎｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ“Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ １１Ｃ−Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”ｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍｏｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｄ．Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ（２００３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）に記載されている。]
[0055] 放射性フッ素化は、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する前駆体化合物の適当な化学基と１８Ｆ−フッ化物との反応を用いた直接標識法によって実施することもできる。１８Ｆは、１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＨ反応体によるＮ−ハロアセチル基のアルキル化によって導入することもでき、−ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）３１８Ｆ誘導体が得られる。アリール系については、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの１８Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−１８Ｆ誘導体への好適な経路である。]
[0056] 本発明の１８Ｆ−標識インビボイメージング剤は、１８Ｆフルオロジアルキルアミンの形成、及び１８Ｆフルオロジアルキルアミンが例えば塩素、Ｐ（Ｏ）Ｐｈ３又は活性化エステルを含有する前駆体化合物と反応する場合にはその後のアミド形成によって、得ることもできる。]
[0057] １８Ｆ−標識誘導体への合成経路のさらなる詳細は、Ｂｏｌｔｏｎ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。]
[0058] ビフェニル
式ＩＩのインビボイメージング剤を合成するための前駆体は、Ａｌｃａｒａｚ ｅｔ ａｌ（２００３ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１３：４０４３〜６）に記載されたものと同様の方法を用いて得ることができる。式ＩＩのインビボイメージング剤の合成に適した前駆体化合物は、次の式ＩＩａの化合物である。]
[0059] 式中、
Ｒ５ａ及びＲ６ａはそれぞれ上記の式ＩＩのＲ５及びＲ６について定義した通りであり、
Ｒ７ａ〜Ｒ１０ａのいずれかは前駆基を表し、残りはそれぞれ上記の式ＩＩのＲ７〜Ｒ１０について定義した通りである。]
[0060] 「前駆基」は、イメージング基を部位特異的に導入するのに適した化学形態のイメージング基と反応する基である。かかる適当な前駆基については、上記で既に説明した。例えば、かかる前駆基としては、特に限定されないが、ヨード、ヒドロキシル、ニトロ、ヨードニウム塩、ブロモ、メシレート、トシレート、トリアルキルスズ、Ｂ（ＯＨ）２及びトリアルキルアンモニウム塩が挙げられる。]
[0061] 式ＩＩａの前駆体化合物は、好ましくは、次の式ＩＩａ＊の化合物である。]
[0062] 式中、Ｒ８ａ＊及びＲ９ａ＊の一方は前駆基であり、他方は水素である。]
[0063] アダマンタン
式ＩＩＩのインビボイメージング剤を合成するための前駆体は、Ｂａｘｔｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１３：４０４７〜５０）、Ｍｉｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ（２００７ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５１：１０３〜１１４）、Ｆｕｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ（２００７ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５０（２４）；５８８２〜５８８５）、国際公開第０３／０８０５７９号に、Ｄｅｉｎｅｔ ｅｔ ａｌ（１９４６ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．；６８（７）；１３２５〜１３２６）、Ｃａｐｐｓ ｅｔ ａｌ（１９３８ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ；６０（９）；２１０４〜２１０６）、欧州特許出願公開第１４４８１９５号、国際公開第２００４／１０５７９６号及び同第０１／２８９９２号に記載されたものと同様の方法を用いて得ることができる。式ＩＩＩのインビボイメージング剤の合成に適した前駆体化合物は、次の式ＩＩＩａの化合物である。]
[0064] 式中、Ｒ１３ａ及びＲ１４ａの一方は前駆基を含み、他方はそれぞれ上記の式ＩＩＩのＲ１３及びＲ１４について定義した通りであり、
Ａｒ３ａは、上記の式ＩＩＩのＡｒ３ついて定義した通りである。]
[0065] 好ましい実施形態では、式ＩＩＩａの前駆体化合物は、次の式ＩＩＩａ＊の化合物である。]
[0066] 式中、Ｒ１３ａ＊はＣ１−６アルキレン−ＮＨＲ１５ａ＊であり、Ｒ１５ａ＊は前駆基を含む。]
[0067] テトラゾール
式ＩＶのインビボイメージング剤を合成するための前駆体は、Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ（１９７１ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１４：２１１〜４）、Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（２００６ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９、３６５９〜３６６６）及び国際公開第２００２／０６４５９８号に記載されたものと同様の方法を用いて得ることができる。式ＩＶのインビボイメージング剤の合成に適した前駆体化合物は、次の式ＩＶａの化合物である。]
[0068] 式中、Ｒ１９ａ及びＲ２０ａの一方は前駆基を含み、他方はそれぞれ上記の式ＩＶのＲ１９及びＲ２０について定義した通りであり、
Ｒ１７ａ及びＲ１８ａは、それぞれ上記の式ＩＶのＲ１７及びＲ１８について定義した通りである。]
[0069] 好ましい実施形態では、式ＩＶａの前駆体化合物は、次の式ＩＶａ＊の化合物である。]
[0070] 式中、Ｒ１７ａ＊及びＲ１８ａ＊は共にハロであり、Ｒ１９ａ＊及びＲ２０ａ＊の一方は前駆基であり、他方は水素である。]
[0071] 以下の表Ｉに、幾つかの前駆体化合物及びそれらに対応する本発明のインビボイメージング剤の例を示す。]
[0072] 表Ｉに示すイメージング剤の非放射性形を、Ｐ２Ｘ７受容体機能アッセイでスクリーニングした。このアッセイは、実施例９に記載されており、アゴニストによる活性化の際に、Ｐ２Ｘ７をトランスフェクトしたＨＥＫ．２９３細胞で非選択的ポアを形成し、それによって色素を細胞に浸透させるＰ２Ｘ７受容体の能力に基づいている。本発明の非放射性化合物を評価するために参照阻害剤として使用される非選択的Ｐ２Ｘチャネルアンタゴニストは、ピリドキサール−ホスフェート−６−アゾフェニル−２’，４’−ジスルホネート（ＰＰＡＤＳ）とした。アッセイの結果を、上の表Ｉに示す。本発明のイメージング剤の非放射性形は、１０μＭ、一般的には、１００ｎＭ濃度で、ＰＰＡＤＳ（参照化合物）と比較して同程度までＰ２Ｘ７機能を阻害することが分かった。]
[0073] それらの非放射性等価物と共に、表Ｉに示すイメージング剤を得るのに使用した合成経路を実施例１〜８に示す。]
[0074] 簡便には、前駆体化合物は、放射性調剤薬局で使用するためのキットの一部として供給できる。かかるキットは、本明細書で定義した前駆体化合物を密封容器内に含む。密封容器は、無菌健全性及び／又は放射能の安全性並びに適宜、不活性ヘッドスペースガス（例えば窒素又はアルゴン）を維持することができ、しかも、シリンジで溶液の添加及び吸引もできる密封容器である。好ましい密封容器はセプタムシールバイアルであり、気密蓋をオーバーシール（通例アルミニウム製）でクリンプしたものである。かかる密封容器は、適宜、例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液の脱気などのため、蓋が真空に耐えることができるという追加の利点も有する。]
[0075] キットに用いられる前駆体化合物は、望ましい無菌の非発熱性物質が得られるように無菌製造条件下で用いられる。前駆体化合物を非滅菌条件下で使用し、最後に例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて滅菌してもよい。好ましくは、前駆体化合物は無菌非発熱性の形態で用いられる。最も好ましくは、無菌の非発熱性の前駆体化合物を上述の密封容器内で提供する。]
[0076] 好ましくは、実施と次の実施の間の汚染の危険性を最小限に低減し、無菌性及び品質を担保するため、キットのすべての部品は使い捨てである。]
[0077] 自動合成及びカセット
好ましい態様では、本発明の合成方法は自動化される。特に、［１８Ｆ］−放射性トレーサーは、現在、自動放射合成装置で調製されることが多い。このような装置は、Ｔｒａｃｅｒｌａｂ（商標）及びＦａｓｔｌａｂ（商標）（共にＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社から市販）を始め、幾つか市販されている。放射化学反応は自動合成装置で、カセットを装置に装着することによって実施される。カセットは、通常は、流路と、反応容器と、各試薬バイアルの取り付け口と、放射合成後の浄化段階に用いられる固相抽出カートリッジとを備える。]
[0078] 別の態様では、本発明は、本発明のインビボイメージング剤の自動合成に適した自動合成装置に装着できるカセットを提供する。]
[0079] 本発明のインビボイメージング剤の自動合成用カセットは、
（ｉ）本明細書で定義した前駆体化合物を収容した容器と、
（ｉｉ）本明細書で定義したインビボイメージング基の適当な供給源で容器を溶出するための手段と
を含む。]
[0080] 本カセットは、さらに、
（ｉｉｉ）過剰のインビボイメージング基を除去するためのイオン交換カートリッジと、任意には、
（ｉｖ）得られる放射性標識生成物を脱保護して、本明細書で定義したインビボイメージング剤を生じさせるためのカートリッジ
を含んでいてもよい。]
[0081] 合成に必要な試薬、溶媒その他の消耗品も、濃度、体積、送出時間などに関するエンドユーザーの条件を満たすように合成装置を動作させるソフトウェアが記憶されたコンパクトディスクのようなデータ媒体と共に含めることができる。]
[0082] イメージング法
本発明のインビボイメージング剤は、被検体のＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の数及び／又は位置のインビボイメージングによる評価に特に有用である。そこで、別の態様では、本発明は、被検体のＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の存在、位置及び／又は量の決定を容易にするために被検体をイメージングする方法であって、
（ｉ）本明細書で定義したインビボイメージング剤を検出可能な量で投与しておいた被検体を準備する段階と、
（ｉｉ）インビボイメージング剤を被検体内のＰ２Ｘ７受容体に結合せしめる段階と、
（ｉｉｉ）イメージング剤から放出される信号をインビボイメージング法で検出する段階と、
（ｉｖ）信号の位置及び／又は量を表す画像を形成する段階と
を含む方法を提供する。]
[0083] 本明細書に記載されている方法は、検出可能な量の本発明のインビボイメージング剤を投与しておいた被検体を「準備」することから始める。本方法の究極的な目的は、診断に有用な画像の提供であり、被検体への本発明のインビボイメージング剤の投与は、画像の形成を容易にするために必要な予備段階であると解される。]
[0084] 本発明のインビボイメージング剤の特性は、ＢＢＢを通過して、ＣＮＳ内のＰ２Ｘ７受容体に結合するのに適している。したがって、本発明の方法では、検出及び形成段階は、被検体のＣＮＳ、好ましくは脳で行われる。]
[0085] 本発明の方法は、健常な被検体におけるＰ２Ｘ７受容体の位置及び／又は量の研究に使用できる。ただし、本方法は、被検体が、Ｐ２Ｘ７受容体の異常発現に関連する病態を有することが知られている又はその疑いがあるとき、特に、異常発現がＣＮＳにおける場合（「Ｐ２Ｘ７状態」）に特に有用である。かかる病態としては、脳卒中、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、癲癇及びアルツハイマー病が挙げられ、各々の病態生理は神経炎症を伴う。「神経炎症」という用語は、ＣＮＳにおけるミクログリア及びアストロサイトの応答及び作用が基本的に炎症様の特徴をもつことをいう。これらの応答は、脳卒中、癲癇、パーキンソン病、多発性硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病及びハンチントン舞踏病を始めとする多種多様な神経障害の病因及び進行の中心である。したがって、本発明の方法で形成される画像は、かかる障害の診断の際の指針を臨床医に与えるために使用される。]
[0086] 別の態様では、本発明は、診断方法であって、上述のイメージング方法の段階（ｉ）〜（ｉｖ）と、さらに、
（ｖ）ＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の異常発現に関連する病態（「Ｐ２Ｘ７状態」）を診断するために、段階（ｉｖ）で形成した画像を評価する段階
を含む方法を提供する。]
[0087] 段階（ｖ）のＰ２Ｘ７状態は、本明細書に記載したいずれかである。評価段階は、医師又は獣医、つまり、臨床診断を行う資格を有する者によって行われる。かかる診断は、演繹的な医学的又は獣医学的判断であり、被検体の健康を回復するのに必要な治療に関する判断をなすために行われる。]
[0088] さらに別の実施形態では、本方法は、本発明のインビボイメージング剤を被検体に投与する予備段階を含んでいてもよい。本発明のインビボイメージング剤の投与は、好ましくは非経口的に、最も好ましくは静脈内に実施される。静脈内経路は、ＢＢＢの向こう側へ本発明のインビボイメージング剤を送達し、ＣＮＳにおいてＰ２Ｘ７受容体と接触させる最速の方法に相当する。インビボイメージング剤及び被検体の好ましい実施形態は、上述の通りである。]
[0089] 本発明のインビボイメージング剤は、好ましくは、生体適合性担体と共に式ＩＩ〜ＩＶのインビボイメージング剤を哺乳類への投与に適した形態で含む「放射性医薬組成物」として投与される。]
[0090] 「生体適合性担体」とは、式ＩＩ〜ＩＶのインビボイメージング剤を懸濁又は溶解できる流体、特に液体であって、放射性医薬組成物が生理学的に認容できるもの、つまり毒性も耐え難い不快感も伴わずに哺乳類の身体に投与することができるものである。生体適合性担体は好適には注射可能な担体液であり、例えば、発熱物質を含まない注射用の滅菌水、食塩液のような水溶液（これは注射用の最終製剤が等張性又は非低張性となるように調整するのに都合がよい）、１種以上の張度調節物質（例えば血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）その他の非イオン性ポリオール材料（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液である。生体適合性担体は、エタノールのような生体適合性の有機溶媒を含んでいてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は製剤の可溶化に有用である。好ましくは、生体適合性担体は発熱物質を含まない注射用水、等張塩類溶液又はエタノール水溶液である。静脈内注射用の生体適合性担体のｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内である。]
[0091] かかる医薬組成物は、好適には、無菌健全性を維持したまま皮下注射針で一回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプオン式セプタムシール蓋）を備えた容器に入れて供給される。かかる容器には、１回又は複数回分の患者用量を入れることができる。好ましい多用量容器は、複数回分の患者用量を収容した単一バルクバイアル（例えば容積１０〜３０ｃｍ３のもの）からなり、臨床症状に応じて製剤の有効期間中様々な時間間隔で１回分の患者用量を臨床グレードのシリンジに吸引することができる。プレフィルドシリンジは１回分の患者用量つまり「単位用量」を収容するように設計され、そのため好ましくは使い捨てその他臨床用に適したシリンジである。プレフィルドシリンジは、適宜、オペレーターを放射能被曝から保護するためのシリンジシールドを備えていてもよい。かかる適当な放射性医薬品シリンジシールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなる。]
[0092] 放射性医薬組成物は、キットから調製することができる。或いは、放射性医薬組成物は、所望の滅菌生成物が得られるような無菌製造条件下で製造してもよい。放射性医薬組成物を非滅菌条件下で調製した後、例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は化学的処理（例えばエチレンオキサイドでの処理）を用いて最終的に滅菌してもよい。]
[0093] 本発明の造影剤に関して上述した通り、放射性医薬組成物に対して最も好ましい本発明の放射性造影基は９９ｍＴｃ、１２３Ｉ、１１Ｃ及び１８Ｆである。]
[0094] 本発明のイメージング方法は研究ツールとしても使用し得る。例えば、競合試験の実施に使用すれば、ある薬物とＰ２Ｘ７受容体との相互作用を研究することができる。かかる試験としては、用量−占有率（dose-occupancy）試験、最適治療用量の決定、薬物候補選抜試験及び関心組織中でのＰ２Ｘ７受容体分布の決定が挙げられる。]
[0095] 別の実施形態では、本発明の方法は、例えば、Ｐ２Ｘ７状態と闘う薬物による治療の前後途中に、繰返し実施される。こうして、治療の効果を経時的にモニターすることができる。]
[0096] 本発明は、医療用、特に被検体のＣＮＳにおける炎症の存在、位置及び／又は量を決定するための方法に用いられる本発明のインビボイメージング剤も提供する。]
[0097] インビボイメージング剤、方法及び被検体の好適かつ好ましい実施形態は、上述の通りである。]
[0098] 本発明の別の態様では、本発明のインビボイメージング剤は、被検体のＣＮＳにおける炎症の存在、位置及び／又は量を決定するための医薬品の調製に用いることができる。インビボイメージング剤及び被検体の好適かつ好ましい実施形態は、上述の通りである。]
[0099] 本発明の特定のインビボイメージング剤の合成方法の詳細を、以下の非限定的な実施例で例示する。]
[0100] 実施例の簡単な説明
実施例１、３、５及び７では、それぞれ非放射性イメージング剤２〜５の合成について記載する。]
[0101] 実施例２、４、６及び８では、それぞれイメージング剤２〜５の合成について記載する。]
[0102] 実施例９は、Ｐ２Ｘ７受容体との結合を評価するためのアッセイについて記載する。]
[0103] 実施例で用いた略語
ＡＩＢＮ：アゾビスイソブチロニトリル
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸
ＢＯＣ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｚ−ＡＴＰ：２’及び３’−Ｏ−（４−ベンゾイルベンゾイル）−ＡＴＰ
ＤＥＡＤ：アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＮＡ：デオキシリボ核酸
ＥＤＣＩ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド
ＭｅＯＨ：メタノール
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＰＰＡＤ：ピリドキサールホスフェート−６−アゾフェニル−２’４’−二スルホン酸
ＲＮＡ：リボ核酸
ＲＴ：室温
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン。]
[0104] 実施例１：非放射性イメージング剤２の合成]
[0105] ３（ｉ）２−（（４−ブロモフェノキシ）メチル）オキシラン（５）
オーブン乾燥した丸底二口フラスコに、４−ブロモフェノール（１５ｇ，８６．７ｍｍｏｌ）を加えた。炭酸カリウム（１４．３ｇ，１．２当量）を加え、混合物を室温で１０分間撹拌した。エピクロロヒドリン（３９．８ｇ，４３０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１２０℃で３時間加熱した。反応物を減圧下で濃縮し、過剰のエピクロロヒドリンを除去した。反応物に水（１００ｍＬ）を加え、酢酸エチル（４×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を一緒にして無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣を、ヘキサン及び酢酸エチルを溶出液として用いたシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物（１３．６ｇ，６９％収率）が得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、６．８３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、４．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、３．３７（ｍ，１Ｈ）、２．９３（ｔ，１Ｈ）、２．７７（ｍ，１Ｈ）、ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋２２７／２２９；Ｃ９Ｈ９ＢｒＯ２の計算値２２８。]
[0106] ３（ｉｉ）１−（４−ブロモフェノキシ）−４−（ピリジン−４−イル）ブタン−２−オール（６）
４−ピコリン（１．０ｇ，１０．７４ｍｍｏｌ）を、オーブン乾燥した丸底フラスコに加え、窒素でフラッシュした。それに、無水ＴＨＦ（８ｍｌ）を加えた。混合物を窒素下に保ち、−７８℃に冷却し、この温度で３０分間撹拌した。ブチルリチウムの溶液（２．５Ｍ，４．８ｍＬ）を加え、混合物をさらに３０分間撹拌した。次いで、反応物を、０℃で、２−（（４−ブロモフェノキシ）メチル）オキシラン（２．４ｇ，１０．４８ｍｍｏｌ）の入った丸底フラスコに加えた。全反応物を、飽和水性塩化アンモニウム（２５ｍＬ）の添加によって奪活し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。抽出物を一緒にして無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で蒸発させた。粗生成物を、ヘキサン及び酢酸エチルを溶出液として用いるシリカゲルのクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（１．１２ｇ，３２％収率）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、７．３９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）７．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）６．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ）、３．７９〜４．０７（ｍ，３Ｈ）、２．６９〜３．０１（ｍ，２Ｈ）、１．９６（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３２２；Ｃ１５Ｈ１７ＢｒＮＯ２の計算値３２１。]
[0107] ３（ｉｉｉ）１−（２’−フルオロ−５’−ニトロ−ビフェニル−４−イルオキシ）−４−ピリジン−４−イル−ブタン−２−オール（７）
６（１当量）と２−フルオロ−５−ニトロフェニルボロン酸（１当量）の混合物を、オーブン乾燥したフラスコに入れた。トルエン及びエタノール（４：１）を加え、次いで、この溶液を水性炭酸ナトリウム（２Ｍ，１．９倍量）に加え、次いで、窒素でパージして溶存酸素を除去した。パラジウム（０）触媒（０．０２当量）を反応混合物に加え、次いで、１．５時間加熱還流した。反応物を、酢酸エチルと水に分配させた。有機相を分離し、食塩水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。次いで、生成物を、ヘキサン及び酢酸エチルを溶出液として用いるシリカゲルのクロマトグラフィーで精製して、所望の精製標品を５９％の収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５３（ｍ，２Ｈ）、８．３７（ｍ，０．５Ｈ）、８．２０（ｍ，０．５Ｈ）、７．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．３０（ｍ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，１Ｈ）、７．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ）、６．７９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ）、３．８１〜４．１２（ｍ，３Ｈ）、２．７１〜３．０１（ｍ，２Ｈ）、１．９３（ｍ，２Ｈ）、ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３８２；Ｃ２１Ｈ１９ＦＮ２Ｏ４の計算値３８１。]
[0108] ３（ｉｖ）３−［１−（２’−フルオロ−５’−ニトロ−ビフェニル−４−イルオキシメチル）−３−ピリジン−４−イル−プロピル］−チアゾリジン−２，４−ジオン（非放射性イメージング剤２）
無水ＴＨＦ中のトリフェニルホスフィン（２当量）の溶液に、アゾジカルボン酸ジエチル（２当量）を加えた。得られたオレンジ色の溶液を１０分間撹拌した後、２，４−チアゾリンジオン（２当量）を加えた。撹拌をさらに１５分間続けた。この反応物に化合物７（１当量）を加え、反応物を２時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、生成物を、ヘキサン及び酢酸エチルを溶出液として用いるシリカゲルでの反復カラムクロマトグラフィーで単離して、所望の精製標品を９６％の収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ）、８．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ，４Ｈｚ）、８．２１（ｍ，１Ｈ）、７．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．１５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ）、６．９８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、４．７７（ｍ，１Ｈ）、４．５４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ）、４．２１（ｍ，１Ｈ）、３．７９（ｓ，２Ｈ）、２．５１〜２．８３（ｍ，３Ｈ）、２．０３〜２．２２（ｍ，１Ｈ）、ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋４８２；Ｃ２４Ｈ２０ＦＮ３Ｏ５Ｓの計算値４８１。]
[0109] 実施例２：イメージング剤２の合成]
[0110] 前駆体化合物２は、非放射性イメージング剤２について述べた方法を用いて調製するが、段階（ｉｉｉ）では、１−（２’−フルオロ−５’−ニトロ−ビフェニル−４−イルオキシ）−４−ピリジン−４−イル−ブタン−２−オールの代わりに１−（２’−クロロ−５’−ニトロ−ビフェニル−４−イルオキシ）−４−ピリジン−４−イル−ブタン−２−オールを合成する。例えば、炭酸カリウム及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘの存在下、アセトニトリル中で［Ｆ−１８］フッ化物を使用して前駆体化合物２を放射性フッ素化すると、イメージング剤２が得られる。]
[0111] 実施例３：非放射性イメージング剤３の合成]
[0112] ５（ｉ）Ｎ−メチル−５−ニトロキノリン（８）
５−ニトロキノリン（２．０ｇ，１１．４９ｍｍｏｌ）、乾燥トルエン（２ｍＬ）及び乾燥ヨウ化メチル（１ｍＬ）の混合物を６時間還流した。明るい赤色の結晶性メチオダイドを濾過し、トルエンで洗浄した。濾液を濃縮し、トルエン中でヨウ化メチルと共に再び還流すると、さらに多量の材料が得られた。このプロセスを、収量の増分が無視できるようになるまで繰り返した。収量＝１５００ｍｇ（６０％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ＝９．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、９．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、８．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、８．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、８．４６〜８．３６（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）、４．７３（３Ｈ，ｓ，Ｎ−ＣＨ３）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋１９０；Ｃ１０Ｈ９Ｎ２Ｏ２の計算値＝１８９。]
[0113] ５（ｉｉ）１−メチル−５−ニトロ−カルボスチリル（９）
Ｎ−メチルキノリン（５．０ｇ，２６．４５ｍｍｏｌ）を水（５０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で０℃に冷却した。水（５０ｍＬ）中のフェリシアン化カリウム（１９．２ｇ，５８．１９ｍｍｏｌ）及び水（８ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（５．３ｇ，１３２．２５ｍｍｏｌ）を同時に、撹拌しながら加えた。塩基の添加は１０分で完了し、酸化剤の添加は３０分で完了した。反応混合物を０℃で９０分間、室温で１８時間撹拌した。カルボスチリルの黄色の結晶性沈殿を濾過し、少量の冷水で洗浄し、乾燥して、黄色の固体（３．５５ｇ，６６％収率）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ＝８．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．９４〜７．７８（３Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）、６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、３．６８（３Ｈ，ｓ，Ｎ−ＣＨ３）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋２０５；Ｃ１０Ｈ８Ｎ２Ｏ３の計算値２０４。]
[0114] ５（ｉｉｉ）２−クロロ−５−ニトロキノリン（１０）
オキシ塩化リン（２５ｍＬ）を、０℃で、ｏ−ジクロロベンゼン中のカルボスチリル９（１．５ｇ，７．３５ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加え、１２時間還流した。次いで、反応混合物を、氷冷水に注いで奪活し、次いで、クロロホルムで抽出した。次いで、溶媒を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させて、ゴム状残渣を得た。生成物は、水とのトリチュレーションにより淡褐色の固体として得られた（５２０ｍｇ，３４％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝９．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、８．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、８．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．８７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ，７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋２０９；Ｃ９Ｈ５Ｎ２Ｏ２Ｃｌの計算値２０８。]
[0115] ５（ｉｖ）２−クロロ−５−アミノキノリン（１１）
２−クロロ−５−ニトロキノリン（３００ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）を氷酢酸（３ｍＬ）に加え、６５℃で撹拌した。鉄粉（４０３ｍｇ）を混合物に加え、撹拌を５時間続けた。次いで、反応混合物を冷却し、濃縮し、残渣を水（２０ｍＬ）で希釈し、ｐＨを、炭酸ナトリウム溶液の添加によって調整した。次いで、生成物を酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出した。抽出物を一緒にして食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させると、褐色油として生成物（２６０ｍｇ＞９０％収率）が得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．５５〜７．４４（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）、７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、６．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋１７９；Ｃ９Ｈ７Ｎ２Ｃｌの計算値１７８。]
[0116] ５（ｖ）Ｎ−（２−クロロキノリン−５−イル）−２−（アダマンチル）アセトアミド（１２）
乾燥ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の１−アダマンタン酢酸（４２３ｍｇ，２．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢｔ（９８ｍｇ，０．７２５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（３５０ｍｇ，１．８１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解した２−クロロ−５−アミノキノリン（２６０ｍｇ，１．４５ｍｍｏｌ）と、次いでトリエチルアミン（５００μｌ、３．６３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を一晩撹拌した。次いで、反応混合物を、水の添加によって奪活し、さらにジクロロメタンを加えて抽出した。有機層を一緒にして無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。生成物は、酢酸エチルを溶出液とした用いたシリカゲルのクロマトグラフィーで黄色乃至褐色固体として単離された（４６０ｍｇ，９０％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝８．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．８６〜７．７９（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）、７．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、２．２９（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、２．０３（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、１．８４〜１．７２（１５Ｈ，ｍ，アダマンタン Ｈ）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋３５５；Ｃ２１Ｈ２３ＯＮ２Ｃｌの計算値３５４。]
[0117] ５（ｖｉ）Ｎ−（２−（２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）キノリン−５−イル）−２−（アダマンチル）アセトアミド（１３）
Ｎ−（２−クロロキノリン−５−イル）−２−（アダマンチル）アセトアミド（１２）（４００ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）をエタノール（８ｍＬ）に溶解し、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−エチレンジアミン（４ｍＬ）を加え、混合物を１４時間還流した。溶媒を除去し、冷水で洗浄した。次いで、残渣をジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸ナトリウム溶液で再び洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、石油エーテルを添加し、生成物を褐色の結晶性固体として沈殿させた（４００ｍｇ，８３％収率）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋４２３；Ｃ２５Ｈ３４Ｎ４Ｏ２の計算値４２２
５（ｖｉｉ）２−（１−アダマンチル）−Ｎ−（２−（２−フルオロエトキシ）エチル）エタン−１，２ジアミノ）アミノ）キノリン−５−イル）アセトアミド（非放射性イメージング剤３）
Ｎ−（２−（２−（２−ヒドロキシエチルアミノ）キノリン−５−イル）−２−（アダマンチル）アセトアミド（１３）（１６０ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶解し、次いで、炭酸セシウム（１３５ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を加えた。フルオロエチルトシレートのジメチルホルムアミド溶液（２ｍＬ中１０６ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を５５℃で２４時間撹拌し、水で奪活し、次いで、酢酸エチルで抽出した。次いで、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。生成物は、酢酸エチルを溶出液とした用いたシリカゲルのクロマトグラフィーで、淡緑色の固体として単離された（３０ｍｇ，２０％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．２８（１Ｈ，ｂｓ，Ａｒ−Ｈ）、７．８２（１Ｈ，ｂｓ，Ａｒ−Ｈ）、７．３５（２Ｈ，ｂｓ，Ａｒ−Ｈ）、６．５８（１Ｈ，ｂｓ，Ａｒ−Ｈ）、４．６８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、４．２６（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２Ｆ）、３．８０〜３．４３（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、２．２２（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＣＯ）、２．００（４Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、１．８３〜１．６０（１５Ｈ，ｍ，アダマンタンＨ）。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ＝７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、７．５２（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ）、７．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、６．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）、４．２６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ２Ｆ）、３．８４〜３．６６（６Ｈ，ｍ，ＣＨ２）、３．５４（２Ｈ，ｂｓ，ＣＨ２）、２．２５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２ＣＯ）、２．０２（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、１．８１〜１．７３（１５Ｈ，ｍ，アダマンタンＨ）。
ＬＣＭＳ質量実測値＝［Ｍ＋Ｈ）＋４６９；Ｃ２７Ｈ３７Ｎ４Ｏ２Ｆの計算値４６８。]
[0118] 実施例４：イメージング剤３の合成
非放射性イメージング剤３の合成について述べた方法を利用し、最終段階で２−フルオロエチルトシレートの代わりに２−［１８Ｆ］−フルオロエチルトシレートを使用することによってイメージング剤３を得ることができる。]
[0119] 実施例５：非放射性イメージング剤４の合成]
[0120] ７（ｉ）３−ブロモメチル−６−フルオロピリジン（１４）
２−フルオロ−５−メチルピリジン（１．２０ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬのオーブン乾燥した丸底フラスコに加え、乾燥窒素でフラッシュした。乾燥四塩化炭素（５０ｍＬ）と、次いでＮＢＳ（１．９２ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）及び触媒量のＡＩＢＮを加えた。反応物を５時間加熱還流した。スクシンイミドを、セライトで濾過して除去し、四塩化炭素を、減圧下での蒸発によって除去した。生成物は、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー［溶出液：１５〜４０％酢酸エチル−ヘキサン］の後で、固体として単離した（１．１５ｇ，５６％収率）。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．２６（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）８．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）７．０２〜７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）４．６２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）ＬＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋１８９／１９１；Ｃ６Ｈ６ＢｒＦＮの計算値１９０。]
[0121] ７（ｉｉ）５−［５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−テトラゾール−１−イルメチル］−２−フルオロ−ピリジン（非放射性イメージング剤４）
オーブン乾燥した丸底フラスコに、乾燥窒素雰囲気下で、５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−１Ｈ−テトラゾール（０．８ｇ，３．７ｍｍｏｌ）、乾燥ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）を加えた。溶液を０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．９ｇ，８．９ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌し、次いで３−ブロモメチル−６−フルオロピリジン（１４）（０．８５ｇ，４．４６ｍｍｏｌ）を加えた。全反応物を室温で１２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、水（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（４×１５ｍＬ）で抽出した。抽出物を一緒にして無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。次いで、粗反応物を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶出液−３０％〜５０％酢酸エチル−ヘキサングラジエント）で精製して、少ない方の量である望ましい１，５−二置換化合物（１２０ｍｇ，１０％収率）及び主要な生成物としての２，５−二置換化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．９１（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）７．７６（ｄｄ，１Ｈ，Ａｒ）７．６８（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）７．３９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）７．２８（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）７．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ａｒ）６．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ａｒ）５．４８（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）
ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３２４；Ｃ１３Ｈ８Ｃｌ２ＦＮ５の計算値３２３。収率＝１０％。]
[0122] 実施例６：イメージング剤４の合成]
[0123] ８（ｉ）５−［５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−テトラゾール−１−イルメチル］−２−ニトロ−ピリジン（前駆体化合物４）
前駆体化合物４は、実施例５で非放射性イメージング剤４について記載した方法を用いて１２％の収率で調製したが、３−ブロモメチル−６−フルオロピリジンの代わりに３−ブロモメチル−６−ニトロピリジンを用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３８（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）８．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）；７．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ，Ａｒ）７．４２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）７．２８（ｓ，１Ｈ，Ａｒ）５．６２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）。
ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３５１；Ｃ１３Ｈ８Ｃｌ２Ｎ６Ｏ２の計算値３５０。]
[0124] ８（ｉｉ）５−［５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−テトラゾール−１−イルメチル］−２−［１８Ｆ］−フルオロ−ピリジン（イメージング剤４）
前駆体化合物４を、例えば、炭酸カリウム及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘの存在下、アセトニトリル中で［Ｆ−１８］フッ化物を使用して放射性フッ素化すると、イメージング剤４を得ることができる。]
[0125] 実施例７：非放射性イメージング剤５の合成
非放射性イメージング剤５は、実施例５で非放射性イメージング剤４について記載した通り調製したが、３−ブロモメチル−６−フルオロピリジンの代わりに３−ブロモメチル−２−フルオロピリジンを用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ａｒ）７．７３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）７．４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，Ａｒ）７．３（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）７．２２（ｍ，１Ｈ，Ａｒ）５．５（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）。
ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３２４；Ｃ１３Ｈ８Ｃｌ２ＦＮ５の計算値３２３。]
[0126] 実施例８：イメージング剤５の合成
１０（ｉ）５−［５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−テトラゾール−１−イルメチル］−２−ニトロ−ピリジン（前駆体化合物５）
前駆体化合物５は、実施例５で非放射性イメージング剤４について記載した方法を用いて１１％の収率で調製したが、３−ブロモメチル−６−フルオロピリジンの代わりに３−ブロモメチル−２−ニトロピリジンを用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ａｒ）７．６８〜７．８６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ）７．３５〜７．５０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ）５．７９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）。
ＬＣＭＳ：質量実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３５１；Ｃ１３Ｈ８Ｃｌ２Ｎ６Ｏ２の計算値３５０。]
[0127] １０（ｉｉ）５−［５−（２，３−ジクロロ−フェニル）−テトラゾール−１−イルメチル］−６−［１８Ｆ］−フルオロ−ピリジン（イメージング剤５）
前駆体化合物５を、例えば、炭酸カリウム及びＫｒｙｐｔｏｆｉｘの存在下、アセトニトリル中で［Ｆ−１８］フッ化物を使用して放射性フッ素化すると、イメージング剤５を得ることができる。]
[0128] 実施例９：Ｐ２Ｘ７結合を決定するためのポア形成アッセイ
使用したアッセイ方法は、ＤＮＡ結合色素、Ｙｏ Ｐｒｏ−１（キノリニウム、４［３−メチル−２（３Ｈ）−ベンゾオキサゾリリデン）メチル］−１−［３−（トリメチル−アンモニオ）プロピル］−ジオキシド）の、拡張した又は「大きなポア形態」のＰ２Ｘ７受容体を通り抜けて入り、細胞内のＤＮＡ／ＲＮＡに結合し、それによって蛍光強度を増す能力に基づいている。したがって、Ｙｏ Ｐｒｏ−１を使用し、Ｐ２Ｘ７機能の阻害を定量化した。このアッセイは、Ｍｉｃｈｅｌ ｅｔ ａｌ（Ｂ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９８；１２５：１１９４〜１２０１）に記載された方法に基づくものである。]
[0129] 最初に、ＨＥＫ．２９３細胞に、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭＬＴＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、７２時間Ｐ２Ｘ７ｃＤＮＡを一過性にトランスフェクトした。使用の４８時間前に、細胞を、３０，０００細胞／ウェルの密度で、ポリ−Ｄ−リシンがコーティングされた９６ウェルの壁面が黒く底が透明のプレート中に播種した。各試験化合物のストック溶液は、１００％ＤＭＳＯ中４０ｍＭの濃度で調製した。]
[0130] ４８時間インキュベーションした後、培養培地を、トランスフェクト細胞から取り除き、細胞を一度洗浄し、予熱したスクロースアッセイ緩衝液（スクロース：２８０ｍＭ、ＫＣｌ：５ｍＭ、ＣａＣｌ２：０．５ｍＭ、グルコース：１０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ：１０ｍＭ、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン：１０ｍＭ；ｐＨ７．４）に入れた。試験化合物を、三つ組みで１０μＭ及び１００ｎＭの濃度でプレートに加え、３７℃で３０分間インキュベートした。アッセイにおける最終ＤＭＳＯ濃度は、１％とした。その後、Ｙｏ Ｐｒｏ−１色素及びＢｚ−ＡＴＰ溶液を、３７℃で６０分間、それぞれ１μＭ及び３０μＭの濃度で加えた。次いで、蛍光を、４８５ｎｍ励起及び５３０ｎｍ発光で読み取った。]
実施例

[0131] 非選択的Ｐ２ＸチャネルアンタゴニストＰＰＡＤＳを、アッセイにおける参照阻害剤として使用した。ＰＰＡＤＳに対する用量−反応を、２００μＭの開始濃度と、続く、２００μＭ〜０．４ｎＭをカバーする１：６連続希釈を使用し、アッセイプレート上で行った。各化合物データセットについて、百分率阻害値を、作成された３つのアッセイポイントに基づいて計算した。]

权利要求:

請求項1
被検体の中枢神経系（ＣＮＳ）のインビボイメージングに適したインビボイメージング剤であって、式ＩＩ〜ＩＶのいずれかの化合物又はその塩若しくは溶媒和物であるインビボイメージング剤。式ＩＩは以下の通り定義される。式中、Ｒ５〜Ｒ１０のいずれかはγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属であるインビボイメージング基を含んでおり、Ｒ５及びＲ６は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６フルオロアルキル、Ｃ１−６アシル、Ｃ１−６フルオロアシル、Ｃ１−６カルボン酸アルキルエステル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６フルオロアルコキシから独立に選択されるものであるか、或いはＲ１及びＲ２は、それらに結合した窒素と共に、含窒素五又は六員複素環であって、適宜、窒素、イオウ又は酸素から選択されるもう１つのヘテロ原子を含んでいてもよく、適宜、環上に１又は２つのオキソ基を有していてもよい含窒素五又は六員複素環を形成し、Ｒ７〜Ｒ９は、水素、ハロ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ５−６アリール又はＣ５−６ハロアリールから独立に選択され、Ｒ１０は、水素、ヒドロキシル、ニトロ、ハロから選択されるものであるか、或いはＣ（＝Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２基であり（Ｒ１１及びＲ１２は、Ｒ５及びＲ６について定義した通りである。）、Ａｒ２は、窒素、酸素及びイオウから選択されるヘテロ原子を０〜３個有する五又は六員アリール基である。式ＩＩＩは以下の通り定義される。式中、Ｒ１３又はＲ１４のいずれかはγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属であるインビボイメージング基を含んでおり、Ａｒ３は、窒素、酸素及びイオウから選択されるヘテロ原子を０〜３個有する五乃至十員芳香族環であり、Ｒ１３及びＲ１４は、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６アルキレン−ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１５Ｒ１６、ＮＨ−Ｃ１−６アルキレン−ＮＲ１５Ｒ１６から独立に選択されるものであり、Ｒ１５及びＲ１６は、水素、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アセチルから独立に選択されるか、或いはＲ１５及びＲ１６は、それらに結合した窒素と共に、窒素、酸素及びイオウから選択される１〜３個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい含窒素Ｃ５〜１２複素環を形成する。式ＩＶは以下の通り定義される。式中、Ｒ１７−２０のいずれかはγ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属であるインビボイメージング基を含んでおり、Ｒ１７及びＲ１８は、水素、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１−３アルキル、Ｃ１−３ハロアルキル及びＣ１−３ヒドロキシアルキルから独立に選択され、Ｒ１９及びＲ２０は、水素、ハロ、Ｃ１−３アルキル及びＣ１−３ハロアルキルから独立に選択され、Ａｒ４は、窒素、酸素及びイオウから選択されるヘテロ原子を０〜３個有する五乃至十二員アリール基である。
請求項2
次の式ＩＩ＊の化合物である、請求項１記載の式ＩＩのインビボイメージング剤。式中、Ｒ８＊及びＲ９＊の一方は１８Ｆであり、他方は水素である。
請求項3
次の式ＩＩＩ＊の化合物である、請求項１記載の式ＩＩＩのインビボイメージング剤。式中、Ｒ１３＊はＣ１−６アルキレン−ＮＨＲ１５＊であり、Ｒ１５＊はＣ１−６［１８Ｆ］−フルオロアルキル又はＣ１−６［１８Ｆ］−フルオロアルコキシである。
請求項4
次の式ＩＶ＊の化合物である、請求項１記載の式ＩＶのインビボイメージング剤。式中、Ｒ１７＊及びＲ１８＊は共にハロであり、Ｒ１９＊及びＲ２０＊の一方は１８Ｆであり、他方は水素である。
請求項5
インビボイメージング基が１２３Ｉ、１１Ｃ及び１８Ｆから選択される、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
請求項6
請求項１記載の式ＩＩのインビボイメージング剤の合成方法であって、インビボイメージング基の適当な供給源を次の式ＩＩａの前駆体化合物と反応させることを含む方法。式中、Ｒ５ａ及びＲ６ａは、それぞれ請求項１でＲ５及びＲ６について定義した通りであり、Ｒ７ａ〜Ｒ１０ａのいずれかは前駆基を表し、残りは請求項１でＲ７〜Ｒ１０について定義した通りである。
請求項7
式ＩＩａの前駆体化合物が次の式ＩＩａ＊の化合物である、請求項６記載の方法。式中、Ｒ８＊及びＲ９＊の一方は前駆基であり、他方は水素である。
請求項8
請求項１記載の式ＩＩＩのインビボイメージング剤の合成方法であって、インビボイメージング基の適当な供給源を次の式ＩＩＩａの前駆体化合物と反応させることを含む方法。式中、Ｒ１３ａ及びＲ１４ａの一方は前駆基を含み、他方はそれぞれ請求項１でＲ１３及びＲ１４について定義した通りであり、Ａｒ３ａは、請求項１でＡｒ３について定義した通りである。
請求項9
式ＩＩＩａの前駆体化合物が次の式ＩＩＩａ＊の化合物である、請求項８記載の方法。式中、Ｒ１３ａ＊はＣ１−６アルキレン−ＮＨＲ１５ａ＊であり、Ｒ１５ａ＊は前駆基を含む。
請求項10
請求項１記載の式ＩＶのインビボイメージング剤の合成方法であって、インビボイメージング基の適当な供給源を次の式ＩＶａの前駆体化合物と反応させることを含む方法。式中、Ｒ１９ａ及びＲ２０ａう一方は前駆基を含み、他方は請求項１でＲ１９及びＲ２０について定義した通りであり、Ｒ１７ａ及びＲ１８ａは、それぞれ請求項１でＲ１７及びＲ１８について定義した通りである。
請求項11
式ＩＶａの前駆体化合物が次の式ＩＶａ＊の化合物である、請求項１０記載の方法。式中、Ｒ１７ａ＊及びＲ１８ａ＊は共にハロであり、Ｒ１９ａ＊及びＲ２０ａ＊の一方は前駆基であり、他方は水素である。
請求項12
当該方法が自動化されている、請求項６乃至請求項１１のいずれか１項記載の方法。
請求項13
請求項１２記載の方法を実施するためのカセットであって、（ｉ）請求項６乃至請求項１１のいずれか１項記載の方法で定義した前駆体化合物を収容した容器と、（ｉｉ）請求項１又は請求項５で定義したインビボイメージング基の適当な供給源で容器を溶出するための手段とを含むカセット。
請求項14
さらに、（ｉｉｉ）過剰のインビボイメージング基を除去するためのイオン交換カートリッジと、任意には、（ｉｖ）得られる放射性標識生成物を脱保護して、前記インビボイメージング剤を生じさせるためのカートリッジとを含む、請求項１３記載のカセット。
請求項15
被検体のＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の存在、位置及び／又は量の決定を容易にするための被検体のイメージング方法であって、（ｉ）請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤が検出可能な量で投与されている被検体を準備する段階と、（ｉｉ）インビボイメージング剤を被検体内のＰ２Ｘ７受容体に結合せしめる段階と、（ｉｉｉ）イメージング剤から放出される信号をインビボイメージング法で検出する段階と、（ｉｖ）信号の位置及び／又は量を表す画像を形成する段階とを含む方法。
請求項16
被検体がインタクトな哺乳類の生体である、請求項１６記載の方法。
請求項17
被検体が、ＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の異常発現に関連する病態を有することが知られている又はその疑いがある、請求項１５又は請求項１６記載の方法。
請求項18
請求項１５記載の段階（ｉ）〜（ｉｖ）と、さらに、（ｖ）ＣＮＳにおけるＰ２Ｘ７受容体の異常発現に関連する病態（「Ｐ２Ｘ７状態」）を診断するために、段階（ｉｖ）で形成した画像を評価する段階を含んでなる診断方法。
請求項19
被検体のＣＮＳにおける炎症の存在、位置及び／又は量を決定するための方法に使用するための請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
請求項20
被検体のＣＮＳにおける炎症の存在、位置及び／又は量を決定するための医薬品の製造に使用するための請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤。
請求項21
請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のインビボイメージング剤を生体適合性担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む放射性医薬組成物。